Therapeutische Antikörper sind aus der heutigen Medizin nicht mehr wegzudenken. Neben dem Einsatz von Antikörpern bei der Behandlung einer Vielzahl verschiedener Krankheiten ist die Krebsbehandlung der wichtigste Anwendungsbereich. Zugelassene Antikörper haben alle den Nachteil, dass sie gegen tumorbezogene Antigene wirken, welche auf Tumorzellen überexprimiert sind, aber ebenfalls auf der Oberfläche gesunder Zellen vorkommen können. Aus diesem Grund können bei der Behandlung mit Antikörpern schwere Nebenwirkungen auftreten. Um die Risiken von Nebenwirkungen zu verringern, wurden verschiedene Ansätze verfolgt, darunter bispezifische, immunmodulatorische, pH-abhängige und proteaseaktivierbare Antikörper. Diese proteaseaktivierbare Antikörper werden später durch tumorassoziierte Proteasen aktiviert, die im gesunden Gewebe nur schwach exprimiert werden. Zusätzlich ist eine Maskierungsdomäne erforderlich. Diese Maskierungsdomänen können entweder aus Domänen bestehen, welche die Interaktion zwischen Antikörper und Antigen durch sterische Hinderung beeinträchtigen oder aus maßgeschneiderten, auf Affinität basierenden Maskierungsdomänen. In dieser Arbeit wurden verschiedene Ansätze verfolgt, um Maskierungsdomänen zu erhalten, welche von Haien abgeleiteten Einzeldomänenantikörpern (vNARs) und von Hühnern abgeleiteten single chain variable fragments (scFvs) basieren, die gegen verschiedene therapeutisch relevante Antikörper gerichtet sind. Im Falle der vNARs basierte ein Ansatz auf einem bestehenden vNAR, der gegen Matuzumab gerichtet ist und eine hemmende Wirkung auf die Matuzumab-EGFR-Interaktion zeigt. Das Einfügen von Histidinen in die CDR3 des vNAR führte zu einem pH-abhängigen Bindungsverhalten mit stark verminderter Affinität. Der Verlust der Affinität konnte weder durch einen SEED-basierten noch durch einen Fusionsansatz an die schwere oder leichte Kette überwunden werden. Die Maskierungseigenschaft ging in diesem Fall bei Fusion an die schwere oder leichte Kette mit Einbau einer Proteaseschnittstelle verloren. Ein weiterer Teil dieses Projekts zielte auf die de novo Isolierung von pH-abhängigen vNARs ab, die gegen Rituximab (Anti-CD20-Antikörper) und 5F9 (Anti-CD47-Antikörper) gerichtet sind. Die Isolierung von pH-abhängigen vNARs war für beide Antikörper erfolgreich. Zwei gegen 5F9 gerichtete vNARs wurden isoliert, während vier gegen Rituximab gerichtete vNARs erhalten wurden, von denen einer weiter charakterisiert wurde. Sowohl die gegen 5F9 gerichteten vNAR als auch der eine untersuchte vNAR gegen Rituximab zeigten Maskierungseigenschaften in Co-Inkubationsexperimenten des jeweiligen Antikörpers mit der jeweiligen Zielzelllinie. Während die Maskierungseigenschaften des gegen 5F9 gerichteten vNAR bei Fusion an den Antikörper nicht mehr beobachtet werden konnten, zeigte der gegen Rituximab gerichtete vNAR in SEED- und Leichte-Ketten-Konstrukten Maskierungseffekte. Der vNAR wurde über mehrere MMP-9-spaltbare Linker an die leichte Kette von Rituximab fusioniert. Im Falle der SEED-Konstrukte wurde eine pH-abhängige Wiederherstellung der Bindung beobachtet, während die Bindung der Leichte-Ketten-Fusionen nach MMP-9-Spaltung wiederhergestellt wurde. Im Falle einer weiteren untersuchten Leichte-Ketten-Fusion konnte der Maskierungseffekt im Leichte-Ketten-Konstrukt auf den Linker und nicht auf den vNAR selbst zurückgeführt werden. Das dritte Projekt im Rahmen dieser Arbeit zielte auf die Isolierung von Anti-Idiotyp-ähnlichen vNARs ab, die gegen einen T-Zell-Rezeptor (TCR) gerichtet sind. Während des Isolationsprozesses wurden vier vNARs erhalten, aber nur einer zeigte eine spezifische TCR-Bindung, während die anderen Varianten eine Bindung an konstanten Domänen zeigten. Das letzte Projekt im Rahmen dieser Arbeit zielte auf die Isolierung von anti-idiotypischen Hühnern scFvs aus einer Immunbibliothek ab, die auf der Immunisierung eines Huhns mit dem scFv des therapeutischen Antikörpers 6G11 (Anti-CD32b-Antikörper) basiert. Durch die Einbeziehung von CD32b in den Sortierungsprozess konnten scFvs isoliert werden, welche die Interaktion zwischen 6G11 und CD32b stören bzw. nicht stören. Die Fusion der scFvs aus dem Screening-Verfahren an die leichte Kette von 6G11 führte zu einer 2700-fachen Reduzierung der Bindung im Vergleich zum unmaskierten 6G11. Nach der Abspaltung des scFvs durch MMP-9 wurde die Bindung wiederhergestellt. Für eine weitere Wiederherstellung der Bindung war die teilweise Entfernung des scFv erforderlich.