Die Immunophiline FKBP51 und FKBP52 spielen eine Schlüsselrolle bei der Hsp90-vermittelten Reifung von Steroidhormonrezeptoren, die für Stressverarbeitung und eine korrekte geschlechtsspezifische Embryonalentwicklung entscheidend sind. Ein wichtiger Vertreter ist der Glucocorticoidrezeptor (GR), dessen Aktivierung durch FKBP51 unterdrückt und durch FKBP52 beschleunigt wird. Trotz ihrer wichtigen Rolle sind die molekularen Wirkungsweisen von FKBP51 und FKBP52 nur unzureichend verstanden, da die dynamischen Interaktionen der FKBP-vermittelten GR-Regulierung experimentell schwer zu analysieren sind. In dieser Arbeit wird der systematische Einbau einer photoreaktiven Aminosäure in menschliche HEK-Zellen vorgestellt, der die Erfassung der dynamischen FKBP51-GR-Hsp90-Interaktionen ermöglicht. Photoreaktive, unnatürliche Aminosäuren werden durch die Erweiterung des genetischen Codes ortsspezifisch eingebaut und fungieren als Sensor für die räumliche Nähe von Proteinen, um die Interaktion mit einer aminosäure-genauen Auflösung zu erfassen. Dies wird zuerst an FKBP51 durchgeführt, wobei die Interaktionsfläche zwischen FKBP51 und Hsp90 weit über die bekannte FKBP51-TPR-Domäne vermittelte Interaktion hinaus gezeigt wird. Sie umfasst zusätzlich die FK1- als auch die FK2-Domäne von FKBP51. Darüber hinaus wird das Hsp90-Cochaperon p23 als direkter Interaktionspartner von FKBP51 identifiziert, was darauf hindeutet, dass für eine funktionierende Hsp90-Maschinerie ein Multiproteinkomplex erforderlich ist. Die Entwicklung einer geeigneten Hochdurchsatzanalyse für die Charakterisierung von Proteininteraktionen mittels ELISA ermöglicht die detaillierte Aufklärung der GR-FKBP51-Interaktionsfläche. Die identifizierten Crosslink-Stellen sind abhängig von einer funktionierenden Hsp90-Cochaperon-Maschinerie und werden durch die Aktivierung des GR gestört. Die Crosslinks zeigen ein charakteristisches Muster und erlauben die relative Orientierung sowie die Interaktionsflächen innerhalb der FKBP51/p23-apoGR-Komplexe zu definieren. Des Weiteren ermöglicht der hier entwickelte ELISA die Quantifizierung der intrazellulären Aktivierung des GR durch Dexamethason. Es wird gezeigt, dass die GR-->FKBP52 Crosslinks fünfmal empfindlicher für die Aktivierung des GR sind als die GR-->FKBP51 Crosslinks. Die ELISA-Daten zeigen, dass die GR-Aktivierung des FKBP52-Hsp90-GR-Komplexes im Vergleich zum FKBP51-Hsp90-GR-Komplex schneller ist. Dies bestätigt die bekannte aktivierende Wirkung von FKBP52 auf den GR sowie der inhibierenden Wirkung von FKBP51. Durch den Einbau von Photocrosslinkern in eine umfassende FKBP51 und GR Mutantenbibliothek wird in dieser Arbeit die Architektur und funktionelle Charakterisierung der FKBP51- und p23-Hsp90-apoGR-Preaktivierungskomplexe gezeigt.