Die verschiedenen Funktionen von RNA haben zu einem großen und zunehmenden Interesse für das Feld der synthetischen Biologie geführt. Ein Beispiel für vielseitige RNA-Moleküle in der synthetischen Biologie sind Aptamere. Aptamere sind in der Lage, an ein breites Spektrum von Zielmolekülen mit hoher Affinität und Spezifität zu binden, weshalb sie oft mit Antikörpern verglichen werden. Mit der SELEX-Methode können Aptamere für bestimmte Zielmoleküle in vitro für ein breites Anwendungsspektrum generiert werden. In der Natur fungieren sie als Sensordomäne von Riboswitchen und regulieren die Genexpression, indem sie an ihr Zielmolekül binden. Riboswitche können mittels synthetischer Biologie auch aus in vitro selektierten Aptameren erzeugt werden. Im Rahmen dieser Arbeit wurde ein neuartiges RNA-Aptamer entwickelt, welches selektiv an eine von zwei lichtinduzierten Isoformen eines bestimmten niedermolekularen Liganden (azoCm) bindet. Die potenzielle Funktion eines solchen Aptamers als Riboswitch wurde untersucht. Ein zuvor durchgeführtes SELEX-Experiment gegen azoCm ergab ein spezifisch bindendes Aptamer (Aptamer 42). Zu Beginn dieser Arbeit wurde dessen Sekundärstruktur mit Hilfe von In-Line Probing analysiert. Wie vorhergehende Untersuchungen zeigten, besaß Aptamer 42 keine Riboswitch-Funktion zur Regulation der GFP-Expression im Modellorganismus Saccharomyces cerevisiae. Daher wurden andere Aptamere aus der gleichen SELEX unter gleichen Bedingungen mittels in vivo Screening getestet. Da kein funktionsfähiger Riboswitch identifiziert werden konnte, wurde ein neues SELEX-Experiment mit einer neuen Aptamer Bibliothek durchgeführt. Die neue SELEX ergab Aptamere, die spezifisch an azoCm binden. Das in vivo Screening von Aptameren aus dieser SELEX führte jedoch nicht zu einem funktionsfähigen azoCm abhängigen Riboswitch. Darum wurde eine neuartige Licht-SELEX Methode entwickelt und durchgeführt. Aptamere aus dieser Licht-SELEX wurden durch eine lichtinduzierte Konformationsänderung von azoCm während des SELEX-Prozesses erzeugt. Dies führte zu einer Anreicherung von Isoform-selektiven Aptameren. Da in vivo Screening der Aptamere aus der Licht-SELEX wiederum keine Riboswitch-Funktion zeigte, wurden in vitro Bindungsstudien durchgeführt. Der Vergleich von drei Aptameren, die die unterschiedlichste Bindungsspezifität zwischen den beiden Isoformen von azoCm zeigten, führte zur Entdeckung eines 13 nt Sequenzmotivs, das nur diesen Aptameren gemeinsam war. Next Generation Sequencing der SELEX und Licht-SELEX Runden ergab, dass dieses Sequenzmotiv ("Lichtmotiv") während der Licht-SELEX Runden spezifisch angereichert wurde, während es sich in den Runden der klassischen SELEX mit hoher Stringenz stufenweise verringerte. Basierend auf dieser Entdeckung wurde eine neue Aptamer Bibliothek für SELEX entworfen, die sowohl das teilweise randomisierte Lichtmotiv als auch vollständig randomisierte Randbereiche enthielt. Eine SELEX mit dieser das Lichtmotiv enthaltenden Bibliothek führte zu einer schnellen Anreicherung innerhalb von fünf Runden. Aptamere aus dieser SELEX wurden auf ihre in vivo Funktionalität getestet. Von den getesteten Aptameren zeigten vier eine genregulatorische Funktion in S. cerevisiae, allerdings mit einem niedrigen Regulationsfaktor von 1,25- bis 1,35-fach. Basierend auf dem am stärksten regulierenden Aptamer B2 wurden teilweise randomisierte Aptamer-Bibliotheken für weitere in vivo Screenings generiert. Während der regulatorische Faktor von B2 mit diesem Ansatz nicht verbessert werden konnte, konnte eine modifizierte Version namens B2-1 entwickelt werden, die die Genexpression in S. cerevisiae dosisabhängig reguliert. Um mehr über das Aptamer B2-1 zu erfahren, wurde seine Bindungsaffinität mittels Isothermer Titrationskalorimetrie analysiert. Die Dissoziationskonstante von B2-1 lag im niedrigen nanomolaren Bereich (23 nM). Eine verkürzte Version von B2-1 zeigte eine niedrige mikromolare Bindung an azoCm, was darauf hindeutete, dass strukturell relevante Teile von B2-1 während der Verkürzung wegfielen. Sowohl B2-1 als auch seine verkürzte Version banden jedoch selektiv nur an eine Isoform von azoCm, während eine Bindung an die andere Isoform nicht festgestellt werden konnte. Das in dieser Arbeit entwickelte Aptamer zeigt eine viel stärkere Diskriminierung zwischen den beiden Isoformen seines lichtschaltbaren Liganden als andere bisher publizierte Isoform-selektive Aptamere. Es zeigt auch die höchste Bindungsaffinität zu seinem Liganden als Isoform-selektive Aptameren in der bisherigen Literatur. Während ein auf diesem Aptamer basierender Riboswitch nur eine geringe regulatorische Funktion aufweist, konnte eine dosisabhängige Regulation der Genexpression nachgewiesen werden. Diese Arbeit beinhaltet daher die ersten Schritte zur Erzeugung eines lichtabhängigen Riboswitches.